Wystawa „Dawni Mistrzowie II” uzupełnia stałą kolekcję o kolejną prezentację wspaniałych dzieł sztuki. Prezentuje unikatowe zbiory, takie jak rosyjskie ikony chrześcijańskie, włoskie malarstwo z XIV i XV wieku oraz bogate malarstwo niderlandzkie i flamandzkie z XV–XVIII wieku.
Wystawa „Dawni Mistrzowie II” jest kontynuacją stałej ekspozycji dawnych mistrzów, prezentującą uzupełniający zestaw wspaniałych dzieł sztuki w różnych kontekstach. Podkreśla unikatowe kolekcje Narodowej Galerii w Pradze oraz jej partnerów, w szczególności rzadką kolekcję rosyjskich ikon chrześcijańskich zachowanych w Pradze, związaną z ich kolekcjonerem, Nikodimem P. Kondakowem. Wystawa prezentuje również znaczącą kolekcję włoskiego malarstwa z XIV i XV wieku, często określanego jako „szkoła prymitywów”, zgromadzoną głównie przez arcyksięcia Franciszka Ferdynanda Austriackiego, stanowiącą największą tego typu kolekcję poza Włochami i obejmującą dzieła z takich miast jak Siena, Florencja, Wenecja i Padwa.
Dalsze wzbogacenie wystawy stanowią malarstwo renesansowe i barokowe autorstwa takich artystów jak Alessandro Allori, Jacopo Bassano i Luca Giordano. Wystawa obejmuje również niezwykłe kolekcje malarstwa niderlandzkiego i flamandzkiego z XV–XVIII wieku, z naciskiem na sztukę z Antwerpii, Amsterdamu, Utrechtu i Lejdy, w tym dzieła Herri met de Bles, Pietera II Brueghela, Petera Paula Rubensa, Anthony’ego van Dycka, Rachel Ruysch, Gerarda Ter Borcha i Nicolaesa Eliasza Pickenoya. Rzadkim obiektem jest ołtarz z „Ukrzyżowaniem” Hansa Raphona, jedyny w pełni zachowany retabel Męki Pańskiej w kolekcjach publicznych w Czechach. Reprezentowane są także dzieła z Europy Środkowej, w tym sztuka norymberska i dzieła z Nadrenii z XV–XVIII wieku autorstwa artystów takich jak Hans Baldung Grien i Hans Dürer, a także sztuka niemiecka i austriacka z XVII i XVIII wieku. Mniejsza, lecz godna uwagi kolekcja sztuki francuskiej i hiszpańskiej z XVII i XVIII wieku zawiera znaczące, pojedyncze prace artystów takich jak Charles Mellin, Pierre Mignard i Bartolomé Esteban Murillo.